TGuide S96 Kit d'ARN de cèl·lules / sang / teixits

A-1 La lisi o homogeneïtzació cel·lular no és suficient

---- Reduir l'ús de mostres, augmentar la quantitat de tampó de lisi, augmentar l'homogeneïtzació i el temps de lisi.

A-2 La quantitat de mostra és massa gran

---- Reduir la quantitat de mostra utilitzada o augmentar la quantitat de tampó de lisi.

A-1 Lisi o homogeneïtzació cel·lular insuficients

---- Reduir l'ús de mostres, augmentar la quantitat de tampó de lisi, augmentar l'homogeneïtzació i el temps de lisi.

A-2 La quantitat de mostra és massa gran

---- Consulteu la capacitat màxima de processament.

L’ARN A-3 no s’elueix completament des de la columna

---- Després d'afegir aigua lliure de RNasa, deixeu-la uns minuts abans de centrifugar-la.

A-4 Etanol a l'eluent

---- Després d’esbandir, centrifugueu de nou i traieu el tampó de rentat tant com sigui possible.

A-5 El medi de cultiu cel·lular no s’elimina completament

---- Quan recopileu cèl·lules, assegureu-vos d’eliminar el medi de cultiu al màxim.

A-6 Les cèl·lules emmagatzemades a RNAstore no es centrifugen eficaçment

---- La densitat de magatzem d’ARN és superior a la mitjana de cultiu cel·lular; de manera que s’hauria d’incrementar la força centrífuga. Es suggereix centrifugar a 3000x g.

A-7 Baix contingut i abundància d'ARN a la mostra

---- Utilitzeu una mostra positiva per determinar si la mostra produeix un baix rendiment.

A-1 El material no és fresc

---- Els teixits frescos s’han d’emmagatzemar en nitrogen líquid immediatament o immediatament posats al reactiu RNAstore per garantir l’efecte d’extracció.

A-2 La quantitat de mostra és massa gran

---- Reduir la quantitat de mostra.

A-3 RNase contamination

---- Tot i que la memòria intermèdia proporcionada al kit no conté RNasa, és fàcil contaminar-la durant el procés d’extracció i s’ha de manipular amb cura.

A-4 Contaminació per electroforesi

---- Substituïu la memòria intermèdia d'electroforesi i assegureu-vos que els consumibles i la memòria intermèdia de càrrega estiguin lliures de contaminació per RNase.

A-5 Massa càrrega per electroforesi

---- Reduïu la quantitat de càrrega de la mostra, la càrrega de cada pou no hauria de superar els 2 μg.

A-1 La quantitat de mostra és massa gran

---- Reduir la quantitat de mostra.

A-2 Algunes mostres tenen un alt contingut d’ADN i es poden tractar amb DNasa.

---- Realitzeu un tractament amb DNasa sense RNasa a la solució d’ARN obtinguda, i l’ARN es pot utilitzar directament per a experiments posteriors després del tractament o es pot purificar amb kits de purificació d’ARN.

Per a vidres, cuits a 150 ° C durant 4 h. Per a envasos de plàstic, submergits en NaOH 0,5 M durant 10 min, després esbandits a fons amb aigua sense RNasa i esterilitzeu-los per eliminar completament la RNasa. Els reactius o solucions utilitzats a l’experiment, especialment l’aigua, han d’estar lliures de RNasa. Utilitzeu aigua lliure de RNasa per a totes les preparacions de reactius (afegiu aigua a una ampolla de vidre neta, afegiu DEPC a una concentració final del 0,1% (V / V), agiteu durant la nit i feu l'autoclau).